日韩欧美亚洲-人妻熟女一区二区三区-久草国产视频-av手机在线-伊人影院综合-国产一区二区三区高清-免费淫片-久久不射影院-欧美国产日韩精品-国产亚洲网站-久久短视频-欧美精品另类-国产精品一区电影-波多野结衣中文字幕一区-日韩三级av在线-婷婷综合亚洲-黄色免费一级视频-国产破处在线-国产精品视频在-国产乱强伦一区二区三区

客戶咨詢熱線:
15021010459
首頁 > 技術文章 > 大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

更新時間:2023-10-07

閱讀:1452

大腸桿菌蛋白表達系統是目前應用*泛,也是實惠的蛋白表達系統。E. coli具有遺傳背景清楚、細胞增殖快、表達量高、穩定性好和抗污染能力強等特點,適用于多種屬蛋白的表達。本文主要講述了大腸桿菌蛋白表達實驗中感受態細胞制備實驗流程和原理。

圖片




01
感受態細胞的概念

COMPETENT
圖片

感受態,是指宿主細胞最容易接受外源基因并實現將其轉化的一種生理狀態,它是由受體菌的遺傳性狀所決定的,同時也受菌齡以及外界環境因子的影響, 比如Ca2+就可以大大促進轉化的作用。細胞的感受態一般出現在對數生長期,新鮮幼嫩的細胞是制備感受態細胞和進行成功轉化的關鍵。

圖片



02
感受態細胞制備的原理

制備感受態細胞的方法是用預冷的CaCl2處理對數生長期的細菌,即用低滲CaCl2溶液在低溫(0℃)時處理快速生長(進入對數生長期)的細菌,從而獲得感受態細胞。此時細胞膨脹成球形,外源DNA分子在低溫條件下易形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附在細胞表面,通過熱激處理促進細胞對外源DNA分子的吸收。轉化效率非常高。此方法的關鍵在于選用的細胞必須處于對數生長期,實驗操作必須在低溫無菌環境下進行。



03
大腸桿菌感受態細胞的制備實驗


01
實驗儀器及試劑
  • 儀器:超凈工作臺,搖床,高壓滅菌鍋,培養箱,制冰機,超低溫冰箱,離心機,接種環,試管,搖瓶(2L),平板,移液槍,槍頭,離心管(500mL),EP管(1.5mL),藍蓋瓶,泡沫箱

  • 試劑:CaCl2溶液:PIPES 1.51g,CaCl2•2H2O 4.41g,甘油 75ml,pH=7.0,定容至500ml。

LB培養基(固體、液體):Tryptone 1.00g,Yeast 0.50g,NaCl 1.00g,定容至100ml。(固體培養基加入1.5%的瓊脂)

抗性:卡那霉素,氨卞青霉素,氯霉素,四環素。

  • 材料:感受態菌株


02
實驗方法及操作步驟
  • 取-80℃凍存的感受態菌株,用接種環劃線分離接種于固體平板上(平板抗性根據感受態選擇),做好標記,倒置于37℃培養箱培養過夜。
  • 第二天,從平板上挑取單個菌落,接種至含有4ml LB培養液(抗性根據感受態選擇)的試管中,37℃,195rpm,震蕩培養過夜。次日取菌液4ml接種至含有400ml LB培養基(抗性根據感受態選擇)的2L搖瓶中,37℃,200rpm震蕩培養約2-3小時。
  • 當菌落OD600nm值達到0.3-0.5時,將搖瓶取出放置于冰上10-15min。在無菌條件下把菌液倒入500ml的預冷的離心管中,離心4℃,3000r,8min。
  • 棄去上清,加入約200ml的預冷的CaCl2溶液,吹打混勻,懸浮菌體,放入冰浴30min。
  • 離心4℃,3000r,8min,棄去上清,加入約8ml預冷的CaCl2溶液,重新懸浮菌體。
  • 將用CaCl2溶液處理后的菌體分裝于1.5ml的EP管中,每管110ul,保存于-80℃的超低溫冰箱中。



04
感受態細胞測試

隨機取1支本次制備的感受態細胞,轉化一個以前轉化成功的質粒,從轉化平板上的菌落數及表達鑒定的SDS-PAGE電泳圖(看是否出現其他的雜帶及蛋白表達情況)判斷感受態的效價。如果效價好,這批感受可以用;否則,要重新制備。


注意事項

圖片
1、每次取感受態細胞時,注意查看庫存,保證庫存不低于15支,少于15支時要及時制備。
1、菌株生長在對數時進行CaCl2處理。
2、全程操作要【低溫無菌】。
3、用CaCl2溶液懸浮菌體時要均勻,不要有塊狀。
4、常用感受態細胞的選擇抗性:BL21(DE3)無抗性;BL21 Codon plus(DE3)具有氯霉素抗性;OrigamiB(DE3)具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達;BL21(DE3)plysS具有氯霉素抗性;Rosetta(DE3)具有氯霉素抗性;Shuffle具有鏈霉素抗性或不用抗性。


久久天天操 | 亚洲一区播放 | 国产尤物| 咪咪成人网 | 国产欧美网站 | 欧美a久久| 清清草在线视频 | 麻豆视频污 | av黄色在线看 | 亚洲精品中文字幕乱码无线 | 国产又粗又猛又爽又黄无遮挡 | 精品成人中文无码专区 | 亚洲欧美激情精品一区二区 | 黄色免费国产 | 第四色在线视频 | 欧美色炮 | 日本大乳美女 | 久久成人在线视频 | 午夜日韩福利 | a毛片| 法国性xxxx精品hd | 日本黄色高清视频 | 韩国一区二区在线播放 | 成人国产片女人爽到高潮 | 一区二区视频在线 | 在线一区二区三区视频 | 国产精品免费久久久 | 最新国产三级 | 国产又粗又猛视频 | 自拍偷拍欧美日韩 | 成人久久国产 | 色噜噜综合网 | 麻豆md0049免费 | 日韩人妻无码精品综合区 | 精品一区二区三区精华液 | 男男一级淫片免费播放 | avav亚洲 | 超能一家人电影免费喜剧在线观看 | 免费三片在线观看网站v888 | 337p日本欧洲亚洲鲁鲁 | a毛片在线| 青青草视频免费观看 | 亚洲视频三区 | 久久成人国产精品入口 | 丰满少妇被猛烈进入无码 | 翔田千里一区二区 | 十大污视频 | 成人午夜激情视频 | 在线观看69 | 古装做爰无遮挡三级聊斋艳谭 | 国产精品久久久久久久久久久不卡 | 日韩在线影视 | 丰满人妻一区二区三区性色 | 日韩污视频在线观看 | 日韩黄色av网站 | 91国内精品久久久 | 国内久久精品 | 凹凸福利视频 | 国产视频精选 | av在线有码| 嫩草导航 | 日日综合网| 最近最经典中文mv字幕 | 国产免费激情 | 夜夜爽av | 亚洲天天做 | 欧美性开放视频 | 日韩一区av在线 | 在线观看日韩av电影 | 国产理论片 | 天天激情综合 | 日韩黄色高清视频 | 中国一级片黄色一级片黄 | 成人性生交生交视频 | 亚洲一区二区精华 | 国产av第一区 | 色久视频 | 国产精品一区二区免费看 | 亚洲一区图片 | 一级黄色性生活视频 | 亚洲色图欧洲色图 | 欧洲美熟女乱又伦 | 黄色理伦 | 精品无码一区二区三区电影桃花 | 免费观看一区二区三区视频 | 一级视频毛片 | 日本三级韩国三级三级a级按摩 | 中文字幕 成人 | 视频在线观看一区二区三区 | 天堂v在线观看 | 久久精品国产露脸对白 | 永久中文字幕 | 性自由色xxxx免费视频 | 奇米影视狠狠 | 日韩第三页 | 日日综合网 | 91av影视 | 99精品久久久久久久 | jizz91| 激情av网 | 久久精品国产亚洲av麻豆蜜芽 | 欧洲亚洲综合 | 久久精品免费电影 | 欧美性免费 | 成年人性生活免费视频 | 亚洲少妇在线 | 一级久久久久久 | 国产精品看片 | 97在线免费视频 | 免费一级全黄少妇性色生活片 | 欧美激情视频网站 | 奇米狠狠干 | 久久中文一区 | 色综合久久网 | 一区二区不卡av | 自拍视频在线 | 国产精品一区二区免费看 | 成人av电影在线播放 | 小镇姑娘高清播放视频 | 欧美黑人孕妇孕交 | 中文字幕亚洲欧美日韩在线不卡 | 欧美激情999| 欧亚av| 亚洲国产成人在线观看 | 国产一区二区三区视频播放 | 色综合色综合 | 性户外野战hd | 天堂视频免费看 | 一本久久综合亚洲鲁鲁五月天 | 四虎网站在线观看 | 好吊视频一区二区 | 2020亚洲天堂| 国产精品一区二区三区久久久 | 亚洲拍拍 | 午夜精品一区二区三 | 国产综合图区 | 一区二区欧美视频 | 在线观看免费视频黄 | 欧美日韩国产精品 | 亚洲精品成人影视 | 97射射 | 精品无码一区二区三区的天堂 | www.国产.com | 色哟哟免费 | 亚洲一区二区精品在线观看 | 成人资源站 | 亚洲一区你懂的 | 国产crm系统91在线 | 亚洲三级在线视频 | av播放在线 | 男女草逼 | 国产视频精品一区二区三区 | 亚洲综合网在线观看 | 国产大片一区二区三区 | 伊人久久久久久久久久 | 日韩无码精品一区二区三区 | 激情综合久久 | 国产精品一区在线观看 | 亚洲黄页| 日韩av综合在线 | 天天爱天天做 | 宅男噜噜噜666在线观看 | 日本人妻换人妻毛片 | 超碰青娱乐 | 大学生一级片 | 精品国产乱码久久久久久蜜柚 | 五月激情站 | 欧美天堂在线观看 | 乳罩脱了喂男人吃奶视频 | 饥渴丰满的少妇喷潮 | 伊人色图 | 99久久精品无码一区二区毛片 | 法国空姐 在线 | 国产免费av片在线观看 | 欧美性猛交ⅹxxx乱大交3 | 日韩一级av毛片 | 最新国产网站 | 美女三级视频 | 国产黄色片免费观看 | 国产精品传媒视频 | 男人和女人在床的app | 国产男女无套 | 成人午夜免费福利视频 | av污| 亚洲九九爱 | 嫩草研究院在线 | 亚洲国产网址 | 毛片毛片女人毛片毛片 | 国产成人精品一二三区 | 久久久久免费视频 | 香蕉视频1024 | 国产黄色片免费在线观看 | 99久久99久久久精品棕色圆 | 国产精品毛片久久久久久 | 中文一区二区在线观看 | 日韩欧美的一区二区 | 中文字幕超碰在线 | 久久人人爱 | 国产精品乱码一区二区 | 特级西西444www高清大视频 | 另类综合小说 | 欧美三级黄色大片 | 欧美性猛交xxxx | 黄色一区二区视频 | 久久国产经典 | 亚洲欧美在线观看 | 一个人在线免费观看www | 欧美激情国产精品 | 亚洲av无码专区在线播放中文 | 亚洲狠狠 | www.99re.| 成人av免费看 | 日本丰满熟妇bbxbbxhd | 最好看的2019中文大全在线观看 | 在线观看国产成人 | 中文字幕在线视频播放 | 尤物视频在线观看视频 | 久久久久久久久久网 | 欧美性生活网 | 国产福利在线导航 | 久久久综合久久久 | 欧美亚洲久久 | 六月丁香综合 | 9l视频自拍蝌蚪9l视频成人 | 欧美亚洲一区二区三区 | 人人妻人人澡人人爽人人欧美一区 | 亚州一二区 | 碧蓝之海动漫在线观看免费高清 | 午夜诱惑痒痒网 | 综合久久久久 | 91蝌蚪少妇 | 免费看欧美黄色片 | 国产精品久久久久久久久免费软件 | 午夜亚洲AV永久无码精品蜜芽 | 在线视频免费观看你懂的 | 欧美精品成人久久 | 777精品久无码人妻蜜桃 | 精品人人人人 | 中文字幕一区2区3区 | 日韩欧美四区 | 青青草成人在线 | 欧美一级淫片免费视频魅影视频 | 中文字幕一区二区三区四区欧美 | www.黄色网址.com | 国产在线第一页 | 男人天堂久久 | 三年大全国语中文版免费播放 | 性欧美视频 | 色婷婷综合成人av | 韩国精品av | 麻豆传媒视频入口 | 女女综合网| 成人高清免费观看 | 伦理片av | 亚洲三级色 | 欧美在线一级 | 国模婷婷| 欧美亚洲第一页 | 成人免费一区二区三区 | 一级黄色片大全 | 美国性生活大片 | 亚洲成人免费视频 | 午夜8888 | 精品久久人妻av中文字幕 | 91l九色lporny | 熟女少妇a性色生活片毛片 毛片久久久久久 | 九一精品在线 | 特大黑人巨交吊性xxxxhd | 一区二区三区啪啪啪 | 极品美妇后花庭翘臀娇吟小说 | 国产精品自拍片 | 手机看片国产精品 | 午夜手机福利 | 强行挺进皇后紧窄湿润小说 | 韩国三级hd中文字幕的背景音乐 | 色片免费看 | 成人免费三级 | 一级做a免费视频 | 国产区精品区 | 色骚网| 日韩一区二区三区四区五区 | 色女人网站 | 国产大片网站 | 日韩国产欧美一区二区三区 | jizz毛片| 黄色小视频在线观看 | 国产69精品久久久久久 | www.国产一区| 色网网站 | 超黄网站在线观看 | 婷婷丁香六月 | 亚洲小说图片区 | 久久久一二三 | 中文在线国产 | 剧情av在线| 色姑娘综合 | 色乱码一区二区三在线看 | 亚洲污视频| 香蕉视频97 | 91精品国产成人 | 日韩精品久久久久久久酒店 | 国模私拍大尺度裸体av | 国产极品久久久 | 女人一区二区三区 | 樱花电影最新免费观看国语版 | 四虎av影视 | 农村老妇性真猛 | 亚洲一区二区三区在线视频 | av一区二区三区在线 | 91入囗 | 国产精品久久AV无码 | wwwxxx亚洲| 欧美猛交xxx | 国产精品极品白嫩在线 | 日韩极品视频 | 91不卡在线 | 加勒比一区二区三区 | 天天躁日日躁狠狠躁av麻豆男男 | 欧美xxx在线观看 | 亚洲精品在线中文字幕 | 中文字幕在线免费 | 免费麻豆国产一区二区三区四区 | 亚洲巨乳在线 | 久久综合婷婷国产二区高清 | 亚洲成年人免费观看 | 蜜桃av在线免费观看 | 日日夜夜天天干 | 亚洲综合av网 | 麻豆免费在线观看视频 | 男人的天堂欧美 | 国产乱子伦精品无码码专区 | 国产精品二区一区 | 狠狠操天天射 | 人妻视频一区二区三区 | 中日韩精品在线 | 成人久久久久久 | 黄色三级国产 | a天堂中文 | 致命魔术电影高清在线观看 | 99福利在线| 国产精品成人电影在线观看 | 秋葵视频成人 | 久久国产影视 | 少妇被按摩师摸高潮了 |